【摘要】 目的： 分析 恶性血液病细遗传学改变。 方法 ：选择临床确诊恶性血液病33例，采用直接法和培养法进行染及体标制备，及显著技术进行核型分析。结果：33例中12例发现明显异常染色体核型，16例为正常核型。结论：染色体检查在恶性血液病诊断分型中具有重要价值。
【关键词】 恶性血液病；染色体；细胞遗传学
1 资料与方法
1.1 一般资料 33例中男19例,女14例；年龄27～90岁，中位年龄57岁；病程10天～8年，平均1.8年。所有患者均经血常规、骨髓细胞学检查，急性白血病（AL）行白血病免疫表型测定，骨髓增殖性疾病和骨髓增生异常综合征、肿瘤骨髓转移行骨髓活检，多发性骨髓瘤行免疫全套、骨骼平片及心电图检查等，按陈灏珠等[1]主编的《实用内 科学 》的诊断标准确诊。33例中急性非淋巴细胞白血病（ANLL）8例，其中M1 1例，M2 2例，M3 2例，M4 1例，M5 2例；急性淋巴细胞白血病（ALL- L1）1例，慢性粒细胞白血病（CML）8例，慢性淋巴细胞白血病（CLL）1例，多发性骨髓瘤（MM）4例，浆细胞白血病（PL）1例，骨髓增生异常综合征（MDS）6例（RA 4例，RAEB 2例），骨髓纤维化（MF）1例，真性红细胞增多症（PV）1例,骨髓转移性恶性肿瘤2例。
1．2 仪器 超净台，双目显微镜，电热恒温培养箱，台式自动平衡离心机，-20℃冰箱，不锈钢正压滤器，精密数显酸度计等。
1．3 细胞遗传学分析 染色体标本制备采用直接法和培养法。用 0.2%肝素湿润之针筒抽取骨髓2ml左右,注入取样瓶,在超净室内抽取标本计数有核细胞,按（1～2）×106/ml无菌接种于1640培养基内。37℃恒温箱放置16小时。加入长春花碱或秋水仙胺 应用 液使终浓度为0.05 μg/ml, 37℃温箱1小时。离心：1000 rpm×10min，弃上清液。加入预温至37℃的0.075 mol/L氯化钾液8ml,轻轻打匀,置37℃ 30 min。加入1 ml固定液轻轻打匀, 离心1000 rpm×10 min。离心后3次固定。再离心1000 rpm×10 min，弃上清,加适量固定液配成细胞悬液,置4℃保存;气干法制片后，10%Giemsa染色后镜检。全部标本用热变性姬姆萨R显带技术进行核型分析。核型异常的描述按人类细胞遗传学国际命名体制[ISCN（1995）]。
2 结 果
33例中17例发现明显的异常染色体核型，16例为正常核型，见表1。CML 8例中有7例出现典型Ph易位即t(9,22) （q34,q11），1例出现2Ph染色体。MM 4例中有3例分别累及x、1号、5号、10号、13号、14号、21号、22号染色体的增加、缺失或易位。AL 9例中有3例初发白血病出现异常染色体。1例MDS转变为ANLL（M1）出现染色体的增加；1例M5出现3号、11号、13号、19号染色体缺失、增加及超3倍体易见；1例ALL（L1）出现Ph染色体。2例M2、2例M3、1例M4、1例M5处于完全缓解期未发现异常染色体。MDS 6例中有1例RAEB出现10号染色体缺失。骨髓转移性肿瘤2例出现1号、9号、14号、19号染色体增加。
3 讨 论
正常人的体细胞染色体数目为46条，并有一定的形态和结构。染色体异常是指染色体的数目不正常和结构畸变，如染色体断裂、缺失、倒位、易位等。恶性血液病的发生与染色体异常密切相关。随着细胞遗传学 研究 的不断进展，染色体分析在CML、AL、MDS、MM等诊治中起着重要作用。尽管大多数CML只需临床表现和血液学检查即可诊断，但有时与类白血病反应及其它骨髓肿瘤鉴别非常困难，Ph染色体的发现使CML诊断更准确。谢新报道CML患者95%为Ph（+）且在临床血液学已经缓解时Ph染色体仍持续存在。CML急变时除Ph染色体外，70%的病例常出现额外的染色体改变，最多见的改变为2Ph，+8和i(17q)。本组8例CML中5例处于血液学缓解期，均Ph（+）；3例急变中2例Ph（+），1例为2Ph。
【关键词】 恶性血液病；染色体；细胞遗传学
1 资料与方法
1.1 一般资料 33例中男19例,女14例；年龄27～90岁，中位年龄57岁；病程10天～8年，平均1.8年。所有患者均经血常规、骨髓细胞学检查，急性白血病（AL）行白血病免疫表型测定，骨髓增殖性疾病和骨髓增生异常综合征、肿瘤骨髓转移行骨髓活检，多发性骨髓瘤行免疫全套、骨骼平片及心电图检查等，按陈灏珠等[1]主编的《实用内 科学 》的诊断标准确诊。33例中急性非淋巴细胞白血病（ANLL）8例，其中M1 1例，M2 2例，M3 2例，M4 1例，M5 2例；急性淋巴细胞白血病（ALL- L1）1例，慢性粒细胞白血病（CML）8例，慢性淋巴细胞白血病（CLL）1例，多发性骨髓瘤（MM）4例，浆细胞白血病（PL）1例，骨髓增生异常综合征（MDS）6例（RA 4例，RAEB 2例），骨髓纤维化（MF）1例，真性红细胞增多症（PV）1例,骨髓转移性恶性肿瘤2例。
1．2 仪器 超净台，双目显微镜，电热恒温培养箱，台式自动平衡离心机，-20℃冰箱，不锈钢正压滤器，精密数显酸度计等。
1．3 细胞遗传学分析 染色体标本制备采用直接法和培养法。用 0.2%肝素湿润之针筒抽取骨髓2ml左右,注入取样瓶,在超净室内抽取标本计数有核细胞,按（1～2）×106/ml无菌接种于1640培养基内。37℃恒温箱放置16小时。加入长春花碱或秋水仙胺 应用 液使终浓度为0.05 μg/ml, 37℃温箱1小时。离心：1000 rpm×10min，弃上清液。加入预温至37℃的0.075 mol/L氯化钾液8ml,轻轻打匀,置37℃ 30 min。加入1 ml固定液轻轻打匀, 离心1000 rpm×10 min。离心后3次固定。再离心1000 rpm×10 min，弃上清,加适量固定液配成细胞悬液,置4℃保存;气干法制片后，10%Giemsa染色后镜检。全部标本用热变性姬姆萨R显带技术进行核型分析。核型异常的描述按人类细胞遗传学国际命名体制[ISCN（1995）]。
2 结 果
33例中17例发现明显的异常染色体核型，16例为正常核型，见表1。CML 8例中有7例出现典型Ph易位即t(9,22) （q34,q11），1例出现2Ph染色体。MM 4例中有3例分别累及x、1号、5号、10号、13号、14号、21号、22号染色体的增加、缺失或易位。AL 9例中有3例初发白血病出现异常染色体。1例MDS转变为ANLL（M1）出现染色体的增加；1例M5出现3号、11号、13号、19号染色体缺失、增加及超3倍体易见；1例ALL（L1）出现Ph染色体。2例M2、2例M3、1例M4、1例M5处于完全缓解期未发现异常染色体。MDS 6例中有1例RAEB出现10号染色体缺失。骨髓转移性肿瘤2例出现1号、9号、14号、19号染色体增加。
3 讨 论
正常人的体细胞染色体数目为46条，并有一定的形态和结构。染色体异常是指染色体的数目不正常和结构畸变，如染色体断裂、缺失、倒位、易位等。恶性血液病的发生与染色体异常密切相关。随着细胞遗传学 研究 的不断进展，染色体分析在CML、AL、MDS、MM等诊治中起着重要作用。尽管大多数CML只需临床表现和血液学检查即可诊断，但有时与类白血病反应及其它骨髓肿瘤鉴别非常困难，Ph染色体的发现使CML诊断更准确。谢新报道CML患者95%为Ph（+）且在临床血液学已经缓解时Ph染色体仍持续存在。CML急变时除Ph染色体外，70%的病例常出现额外的染色体改变，最多见的改变为2Ph，+8和i(17q)。本组8例CML中5例处于血液学缓解期，均Ph（+）；3例急变中2例Ph（+），1例为2Ph。
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