在人类生活环境的天然本底辐射中，由于吸入氡及其子体所产生的辐射剂量约占54%，氡暴露导致的健康危害，已成为近年来的 研究 热点。大鼠气管-支气管上皮细胞是研究氡暴露生物效应的良好模型，但由于受到染毒装置等条件的限制，过去多进行体外研究。本实验利用多功能移动式氡室对大鼠动态吸入染毒，利用建立的动物模型，采用消化后刷洗法分离得到大鼠气管-支气管上皮细胞［1］，观察氡染毒后靶细胞体外发生转化的过程，探讨氡暴露对细胞的损伤效应。
1 材料与 方法
11 实验动物处理 实验用Wistar雄性大鼠，7～8周龄(上海斯莱克实验动物有限责任公司)许可证号：SCXK(沪)2003-0003。采用自制HD-3型多功能移动式氡室，对大鼠动态吸入染毒。按照氡染毒的累计暴露量，分为60，90，120工作月(Working Level Month,WLM)和对照组共4组，每组6只动物。染毒时间每天8h，每周6d，染毒期间动物自由活动饮食。
12 选择性培养基制备 选择性F12培养基为Ham’s F12培养基，含有2%胎牛血清，5mg/L胰岛素，03μ mol/L氢化可的松。
13 气管-支气管上皮细胞的分离和培养 实验组及对照组大鼠气管-支气管上皮细胞的分离和培养采用本实验室建立的消化后刷洗法，见 文献 ［1］。
14 细胞集落形成率 收集大鼠气管-支气管上皮细胞，制成细胞悬液，以1×105个/60mm培养皿接种于无血清完全F12培养基中37℃5%CO2培养箱中培养，7～8d后计数其形成的细胞集落数，并根据接种的细胞量 计算 细胞集落形成率(CFE)。一个细胞集落的标准是含有15个细胞以上的细胞团，CFE=细胞集落数/接种的细胞量×100%。
15 细胞存活率 根据CFE得出的结果，计算出大鼠气管-支气管上皮细胞存活率。其计算公式为：细胞存活率=氡暴露组细胞集落形成率/对照组细胞集落形成率×100%。
16 转化细胞筛选 上述细胞集落计数后，即转入选择性F12培养基对气管-支气管上皮细胞进行筛选。4d换液1次，选择性培养5周，计数转化细胞集落并统计转化率(TF)，TF=转化细胞集落数/进入选择的细胞集落数×100%。
17 转化细胞系的建立 大鼠气管-支气管上皮细胞经选择性培养5周后，根据Kitamural［2］报道的形态学标准，细胞小而密集的Ⅲ或Ⅳ型集落是具有转化趋向的集落，倒置显微镜下鉴定后，用消毒棉签除去其他的集落细胞，使每皿只含有一个转化集落，继续培养，对Ⅲ或Ⅳ型集落扩增，然后转移到培养瓶中，进行传代培养。
1 材料与 方法
11 实验动物处理 实验用Wistar雄性大鼠，7～8周龄(上海斯莱克实验动物有限责任公司)许可证号：SCXK(沪)2003-0003。采用自制HD-3型多功能移动式氡室，对大鼠动态吸入染毒。按照氡染毒的累计暴露量，分为60，90，120工作月(Working Level Month,WLM)和对照组共4组，每组6只动物。染毒时间每天8h，每周6d，染毒期间动物自由活动饮食。
12 选择性培养基制备 选择性F12培养基为Ham’s F12培养基，含有2%胎牛血清，5mg/L胰岛素，03μ mol/L氢化可的松。
13 气管-支气管上皮细胞的分离和培养 实验组及对照组大鼠气管-支气管上皮细胞的分离和培养采用本实验室建立的消化后刷洗法，见 文献 ［1］。
14 细胞集落形成率 收集大鼠气管-支气管上皮细胞，制成细胞悬液，以1×105个/60mm培养皿接种于无血清完全F12培养基中37℃5%CO2培养箱中培养，7～8d后计数其形成的细胞集落数，并根据接种的细胞量 计算 细胞集落形成率(CFE)。一个细胞集落的标准是含有15个细胞以上的细胞团，CFE=细胞集落数/接种的细胞量×100%。
15 细胞存活率 根据CFE得出的结果，计算出大鼠气管-支气管上皮细胞存活率。其计算公式为：细胞存活率=氡暴露组细胞集落形成率/对照组细胞集落形成率×100%。
16 转化细胞筛选 上述细胞集落计数后，即转入选择性F12培养基对气管-支气管上皮细胞进行筛选。4d换液1次，选择性培养5周，计数转化细胞集落并统计转化率(TF)，TF=转化细胞集落数/进入选择的细胞集落数×100%。
17 转化细胞系的建立 大鼠气管-支气管上皮细胞经选择性培养5周后，根据Kitamural［2］报道的形态学标准，细胞小而密集的Ⅲ或Ⅳ型集落是具有转化趋向的集落，倒置显微镜下鉴定后，用消毒棉签除去其他的集落细胞，使每皿只含有一个转化集落，继续培养，对Ⅲ或Ⅳ型集落扩增，然后转移到培养瓶中，进行传代培养。
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