[摘要] 在香菇菌液体发酵的基础上，先对香菇菌种加硒驯化，再进行富硒香菇液体深层发酵的工艺条件实验。 研究 香菇菌丝体在发酵过程中对有机硒的耐受力和生物转化力。结果表明：经过驯化后的香菇菌在含有60 mg/kg 亚硒酸钠(Na2SeO3)的固体培养基上和含有80 mg/kg亚硒酸钠 (Na2SeO3) 的液体种子培养基及含有130 mg/kg亚硒酸钠 (Na2SeO3) 的液体发酵培养基中生长良好，并可以在菌丝体内富集硒。
[关键词] 富硒香菇；菌种加硒驯化；液体发酵
[Abstract] On the basis of lentinus edodes liquid fermentation, firstly domestication of selenium on lentinus edodes, then we performed deep fermentation technics experiments for lentinus edodes liquid of selenium-enriched, we studyed the tolerance and biotransformation of lentinus edodes mycelium to organic selenium in the process of fermentation. The results showed that lentinus edodes treated with selenium growed well in the solid mediums containing 60 mg/kg Na2SeO3, liquid seed mediums containing 80 mg/kg Na2SeO3 and liquid fermentation mediums containing 130 mg/kg Na2SeO3, and enrich selenium in the mycelium.
[Key words] Selenium-enriched Lentinus edodes; Bacterial domestication with selenium; Liquid fermentation
香菇（lentinus edodes）属担子菌纲伞菌目香菇属。从香菇中提取的香菇多糖颇受医药学科研究工作者的重视，特别是富硒香菇多糖。据 现代 研究证实它具有较强的抗病毒、抗肿瘤、抗衰老等作用。是辅助性T细胞活性的恢复剂和巨噬细胞参与的T细胞免疫增强剂。但是，由于产量低价格昂贵，临床 应用 受到一定限制[1-3]。
如果在香菇菌液体发酵时，把亚硒酸钠添加到培养基中，通过菌丝细胞内物质代谢转化，使有机硒结合到大分子活性物质上，成为有机硒多糖和硒蛋白。用这种 方法 得到的富硒香菇产品，较栽培法具有周期短，效率高，成本低等优点，是食药两用的优良产品。
本实验在原香菇菌深层发酵的基础上，对富硒香菇的液体发酵条件，进行了初步的探讨。
1实验材料
1.1出发菌株
由本室提供
1.2培养基
1.2.1基础斜面培养基（PDA）土豆（去皮）200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）3 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）1.5 g、水1 L、pH6.0。
1.2.2基础种子培养基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黄豆饼粉10 g（浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白冻2 g、玉米粉10 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.6 g、水1 L、pH6.0。
1.2.3基础发酵培养基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黄豆饼粉15 g（不必制成浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白冻2 g、玉米粉10 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.6 g、 水1 L、pH6.0。
1.3化学试剂
亚硒酸钠(Na2SeO3)及其他化学试剂均为国产 分析 纯。
2实验方法
2.1 香菇菌种加硒驯化
将4℃冰箱保存的香菇菌，接种到基础斜面培养基上，进行活化培养，传至3代后，菌丝生长丰满，为实验用斜面。采用梯度法，在固体培养基中逐步增加硒的含量，浓度分别为20、40、60、80、100 mg/kg Na2SeO3诱导菌丝体对硒的耐受能力。方法为：将活化好的母斜面在无菌条件下，取适量菌丝，接种到含硒20 mg/kg的斜面培养基上，26℃恒温培养。72 h后，每隔24 h观察一次菌丝生长情况。当菌丝长满斜面时，再接入到含硒40 mg/kg斜面培养基上培养。以此类推逐级驯化，每个梯度接种5支斜面并根据菌丝生长情况进行重复培养。
2.2摇瓶种子培养
在500 ml三角瓶内，装入80 ml分别含有 60、 70、 80、 90、100 mg/kg Na2SeO3种子培养基，以无硒种子培养基作对照，取经过初步驯化的香菇菌斜面，挖块约1 cm2接入瓶内，置26℃恒温摇床，170 r/min，培养7 h，测定菌丝干重。
2.3摇瓶发酵培养
在500 ml三角瓶内，装入100 ml分别含有70、90、110、130、150、170 mg/kg Na2SeO3发酵培养基, 以无硒发酵培养基作对照，将加硒培养的种子液接入发酵瓶内。初始pH值6.0，26℃恒温摇床170 r/min，培养7 h，测定菌丝干重。每个梯度重复3个样本，重复3批，取平均值。
2. 4分析测定
2.4.1菌丝干重测定 取发酵液100 ml, 经5 000 r/min离心15 min，收集沉淀菌丝体60℃烘干至恒重， 电子 天平称重。
2.4.2菌丝体内硒含量测定 由 中国 疾病预防控制中心营养与食品安全研究所测定。
2.4.3 pH值测定 pH酸度计。
[关键词] 富硒香菇；菌种加硒驯化；液体发酵
[Abstract] On the basis of lentinus edodes liquid fermentation, firstly domestication of selenium on lentinus edodes, then we performed deep fermentation technics experiments for lentinus edodes liquid of selenium-enriched, we studyed the tolerance and biotransformation of lentinus edodes mycelium to organic selenium in the process of fermentation. The results showed that lentinus edodes treated with selenium growed well in the solid mediums containing 60 mg/kg Na2SeO3, liquid seed mediums containing 80 mg/kg Na2SeO3 and liquid fermentation mediums containing 130 mg/kg Na2SeO3, and enrich selenium in the mycelium.
[Key words] Selenium-enriched Lentinus edodes; Bacterial domestication with selenium; Liquid fermentation
香菇（lentinus edodes）属担子菌纲伞菌目香菇属。从香菇中提取的香菇多糖颇受医药学科研究工作者的重视，特别是富硒香菇多糖。据 现代 研究证实它具有较强的抗病毒、抗肿瘤、抗衰老等作用。是辅助性T细胞活性的恢复剂和巨噬细胞参与的T细胞免疫增强剂。但是，由于产量低价格昂贵，临床 应用 受到一定限制[1-3]。
如果在香菇菌液体发酵时，把亚硒酸钠添加到培养基中，通过菌丝细胞内物质代谢转化，使有机硒结合到大分子活性物质上，成为有机硒多糖和硒蛋白。用这种 方法 得到的富硒香菇产品，较栽培法具有周期短，效率高，成本低等优点，是食药两用的优良产品。
本实验在原香菇菌深层发酵的基础上，对富硒香菇的液体发酵条件，进行了初步的探讨。
1实验材料
1.1出发菌株
由本室提供
1.2培养基
1.2.1基础斜面培养基（PDA）土豆（去皮）200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）3 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）1.5 g、水1 L、pH6.0。
1.2.2基础种子培养基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黄豆饼粉10 g（浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白冻2 g、玉米粉10 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.6 g、水1 L、pH6.0。
1.2.3基础发酵培养基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黄豆饼粉15 g（不必制成浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白冻2 g、玉米粉10 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1 g、硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.6 g、 水1 L、pH6.0。
1.3化学试剂
亚硒酸钠(Na2SeO3)及其他化学试剂均为国产 分析 纯。
2实验方法
2.1 香菇菌种加硒驯化
将4℃冰箱保存的香菇菌，接种到基础斜面培养基上，进行活化培养，传至3代后，菌丝生长丰满，为实验用斜面。采用梯度法，在固体培养基中逐步增加硒的含量，浓度分别为20、40、60、80、100 mg/kg Na2SeO3诱导菌丝体对硒的耐受能力。方法为：将活化好的母斜面在无菌条件下，取适量菌丝，接种到含硒20 mg/kg的斜面培养基上，26℃恒温培养。72 h后，每隔24 h观察一次菌丝生长情况。当菌丝长满斜面时，再接入到含硒40 mg/kg斜面培养基上培养。以此类推逐级驯化，每个梯度接种5支斜面并根据菌丝生长情况进行重复培养。
2.2摇瓶种子培养
在500 ml三角瓶内，装入80 ml分别含有 60、 70、 80、 90、100 mg/kg Na2SeO3种子培养基，以无硒种子培养基作对照，取经过初步驯化的香菇菌斜面，挖块约1 cm2接入瓶内，置26℃恒温摇床，170 r/min，培养7 h，测定菌丝干重。
2.3摇瓶发酵培养
在500 ml三角瓶内，装入100 ml分别含有70、90、110、130、150、170 mg/kg Na2SeO3发酵培养基, 以无硒发酵培养基作对照，将加硒培养的种子液接入发酵瓶内。初始pH值6.0，26℃恒温摇床170 r/min，培养7 h，测定菌丝干重。每个梯度重复3个样本，重复3批，取平均值。
2. 4分析测定
2.4.1菌丝干重测定 取发酵液100 ml, 经5 000 r/min离心15 min，收集沉淀菌丝体60℃烘干至恒重， 电子 天平称重。
2.4.2菌丝体内硒含量测定 由 中国 疾病预防控制中心营养与食品安全研究所测定。
2.4.3 pH值测定 pH酸度计。
收藏