作者：谢水林，王翌尧，谭玉溪，卢沛枫，田春娟，戴仁科
【摘要】 目的 研究荷叶碱在大鼠体内的药动学特征及其绝对生物利用度。 方法 SD大鼠分别静脉注射 (5 mg·kg-1)和口服(20 mg·kg-1)荷叶碱，给药后不同时间点取血，分离血浆，LCMS/MS法测定血浆中荷叶碱的药物浓度，用DAS软件处理数据并 计算 药动学参数，求其绝对生物利用度。结果 静脉注射荷叶碱的药动学参数： AUC(0-∞)为(1 118.24±420.90) ng·h·mL-1,Cmax为(1 213.17±359.29) ng·mL-1，t1/2为(1.30±0.69) h;口服荷叶碱的药动学参数：AUC(0-∞)为(3 111.34±1 986.29) ng·h·mL-1，Cmax为(1 257.50±942.37) ng·mL-1,t1/2为(4.89±2.88) h,tmax为(0.33±0.18) h;剂量归一法计算得荷叶碱在大鼠体内的绝对生物利用度为69.56%。结论 该方法专属性强，灵敏度高，可用于荷叶碱的体内定量分析。
【关键词】 荷叶碱;药动学;绝对生物利用度;LCMS/MS法
Abstract:Objective To investigate the pharmacokinetic characteristics of nuciferine and its absolute bioavailability in rats.Methods I.v.(5 mg·kg-1) and p.o. (20 mg·kg-1) administration were given to SD rats respectively, and the plasma concentration of nuciferine in rats was determined by LCMS/MS.Results The main pharmacokinetic parameters through i.v. and p.o. were as followed: respectively, AUC(0-∞)(1 118.24±420.90) and (3 111.34±1986.29) ng·h·mL-1, Cmax (1 213.17±359.29) and (1 257.50±942.37) ng·mL-1;t1/2 (1.30±0.69) and (4.89±2.88) h. tmax was (0.33±0.18) h via p.o.. The absolute bioavailability was 69.56% after dosage correction.Conclusion This method is specific and sensitive, suitable for in vitro determination of nuciferine.
Key words:nuciferine; pharmacokinetics; absolute bioavailability;LCMS/MS
荷叶为睡莲科莲属植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的叶，味苦，平，归肝、脾、胃经，具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的功效。荷叶碱(nuciferine)作为荷叶的主要活性成分，具有降脂减肥、抑菌、抗病毒等药理活性[1～3]。有关荷叶碱的绝对生物利用度的研究尚未见 文献 报道。本实验采用高效液相串联质谱法分别测定大鼠静脉注射和口服荷叶碱后的血药浓度，并对其体内药动学过程和绝对生物利用度进行了研究，为荷叶生物碱提取物进一步的临床应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 主要仪器 API3000型三重四极串联质谱仪(美国Applied Biosystem公司);LC20AD高效液相色谱仪(岛津);LNGT83真空离心浓缩系统(国产);AND微量 电子 天平(日本);3k15高速台式离心机(美国Sigma公司)。
1.1.2 药品与试剂 荷叶碱对照品( 中国 药品生物制品检定所，批号：111566200402);内标非那西丁(中国药品生物制品检定所，批号：100783200401);甲醇、乙酸乙酯、乙腈均为色谱纯，其它试剂为分析纯。
1.1.3 实验动物 健康SD大鼠12只，雌雄各半，体质量(200+10)g，购自南方医科大学实验动物中心(证号为SCXK粤2006-0015)，实验前12 h禁食不禁水。
1.2 实验方法
1.2.1 动物实验方案 12只SD大鼠，雌雄各半，体质量(210±5)g，称重后随机分成两组：一组静脉给药(5 mg/kg)，另一组口服给药(20 mg/kg)，给药后0.033、0.17、0.5、1、1.5、2、4、8、12、24 h 经眼眶静脉取血约0.3 mL，置于有肝素的1.5 mL的EP管中，分离血浆后置于-20 ℃保存。
1.2.2 对照品溶液及内标溶液的制备 精密称取荷叶碱对照品，用甲醇溶解配制成100 μg/mL的对照品贮备液。临用时采用流动相甲醇水(体积比1∶1)按倍数稀释法配成一系列质量浓度为1、3、10、30、100、300、1 000、3 000 ng/mL的荷叶碱对照品溶液作为标准工作液备用。另取适量的非那西丁作为内标，用乙腈溶解并稀释成100 ng/mL的溶液备用。
1.2.3 血浆样品处理方法 取血浆样品100 μL，加入100 μL的甲醇水(体积比1∶1)溶液，20 μL的非那西丁内标液，涡流混合1 min，然后加入800 μL乙酸乙酯，涡流5 min,离心10 min(14 000 r/min)，取上层有机相，置离心浓缩仪中吹干，残渣用甲醇水(体积比1∶1)溶液定容至100 μL，取20 μL进样。
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【摘要】 目的 研究荷叶碱在大鼠体内的药动学特征及其绝对生物利用度。 方法 SD大鼠分别静脉注射 (5 mg·kg-1)和口服(20 mg·kg-1)荷叶碱，给药后不同时间点取血，分离血浆，LCMS/MS法测定血浆中荷叶碱的药物浓度，用DAS软件处理数据并 计算 药动学参数，求其绝对生物利用度。结果 静脉注射荷叶碱的药动学参数： AUC(0-∞)为(1 118.24±420.90) ng·h·mL-1,Cmax为(1 213.17±359.29) ng·mL-1，t1/2为(1.30±0.69) h;口服荷叶碱的药动学参数：AUC(0-∞)为(3 111.34±1 986.29) ng·h·mL-1，Cmax为(1 257.50±942.37) ng·mL-1,t1/2为(4.89±2.88) h,tmax为(0.33±0.18) h;剂量归一法计算得荷叶碱在大鼠体内的绝对生物利用度为69.56%。结论 该方法专属性强，灵敏度高，可用于荷叶碱的体内定量分析。
【关键词】 荷叶碱;药动学;绝对生物利用度;LCMS/MS法
Abstract:Objective To investigate the pharmacokinetic characteristics of nuciferine and its absolute bioavailability in rats.Methods I.v.(5 mg·kg-1) and p.o. (20 mg·kg-1) administration were given to SD rats respectively, and the plasma concentration of nuciferine in rats was determined by LCMS/MS.Results The main pharmacokinetic parameters through i.v. and p.o. were as followed: respectively, AUC(0-∞)(1 118.24±420.90) and (3 111.34±1986.29) ng·h·mL-1, Cmax (1 213.17±359.29) and (1 257.50±942.37) ng·mL-1;t1/2 (1.30±0.69) and (4.89±2.88) h. tmax was (0.33±0.18) h via p.o.. The absolute bioavailability was 69.56% after dosage correction.Conclusion This method is specific and sensitive, suitable for in vitro determination of nuciferine.
Key words:nuciferine; pharmacokinetics; absolute bioavailability;LCMS/MS
荷叶为睡莲科莲属植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的叶，味苦，平，归肝、脾、胃经，具有清暑利湿、升发清阳、清心去热、止血利水的功效。荷叶碱(nuciferine)作为荷叶的主要活性成分，具有降脂减肥、抑菌、抗病毒等药理活性[1～3]。有关荷叶碱的绝对生物利用度的研究尚未见 文献 报道。本实验采用高效液相串联质谱法分别测定大鼠静脉注射和口服荷叶碱后的血药浓度，并对其体内药动学过程和绝对生物利用度进行了研究，为荷叶生物碱提取物进一步的临床应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 主要仪器 API3000型三重四极串联质谱仪(美国Applied Biosystem公司);LC20AD高效液相色谱仪(岛津);LNGT83真空离心浓缩系统(国产);AND微量 电子 天平(日本);3k15高速台式离心机(美国Sigma公司)。
1.1.2 药品与试剂 荷叶碱对照品( 中国 药品生物制品检定所，批号：111566200402);内标非那西丁(中国药品生物制品检定所，批号：100783200401);甲醇、乙酸乙酯、乙腈均为色谱纯，其它试剂为分析纯。
1.1.3 实验动物 健康SD大鼠12只，雌雄各半，体质量(200+10)g，购自南方医科大学实验动物中心(证号为SCXK粤2006-0015)，实验前12 h禁食不禁水。
1.2 实验方法
1.2.1 动物实验方案 12只SD大鼠，雌雄各半，体质量(210±5)g，称重后随机分成两组：一组静脉给药(5 mg/kg)，另一组口服给药(20 mg/kg)，给药后0.033、0.17、0.5、1、1.5、2、4、8、12、24 h 经眼眶静脉取血约0.3 mL，置于有肝素的1.5 mL的EP管中，分离血浆后置于-20 ℃保存。
1.2.2 对照品溶液及内标溶液的制备 精密称取荷叶碱对照品，用甲醇溶解配制成100 μg/mL的对照品贮备液。临用时采用流动相甲醇水(体积比1∶1)按倍数稀释法配成一系列质量浓度为1、3、10、30、100、300、1 000、3 000 ng/mL的荷叶碱对照品溶液作为标准工作液备用。另取适量的非那西丁作为内标，用乙腈溶解并稀释成100 ng/mL的溶液备用。
1.2.3 血浆样品处理方法 取血浆样品100 μL，加入100 μL的甲醇水(体积比1∶1)溶液，20 μL的非那西丁内标液，涡流混合1 min，然后加入800 μL乙酸乙酯，涡流5 min,离心10 min(14 000 r/min)，取上层有机相，置离心浓缩仪中吹干，残渣用甲醇水(体积比1∶1)溶液定容至100 μL，取20 μL进样。
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