作者：代晶 朱军 赵淼 杨万清
【摘要】
目的 建立测定维生素E(VitE)含量的高效液相色谱法。 方法 采用Shimadzu C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇为流动相；检测波长为284 nm，流速1.5 ml·min-1。结果 维生素E在0.125～5.0 mg·ml-1范围内，峰面积与其浓度线性关系良好（r＝0.999 9），高、中、低3种浓度的平均加样回收率为101.4％～102.7%，RSD为0.46％～0.71%，最低检测限为0.4μg·ml-1。结论 本法准确、简便、快速，适用于维生素E片的含量测定。
【关键词】 维生素E；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish a RP-HPLC for determination of Vitamin E.Method Vitamin E was determinated on HPLC instrument fixed a Shimadzu C18 column (4.6mm×250mm，5μm) with UV detection at 284nm, and the mobile phase was MeOH, the flow rate was 1.5ml·min-1.Results The calibration curve was linear(r=0.9999)within the range of 0.125～5.0 mg·ml-1 for Vitamin E, the average recovery rates were from 101.4% to 102.7% for three different levels of the amount of Vitamin E,RSD was from 0.46％ to 0.71%,and LOD was 0.4μg·mL-1.Conclusion This method was simple，quick，accurate and effective for determination of Vitamin E.It was suitable for the quality control for tabella Vitamin E.
Key words:Vitamin E;HPLC;determination
维生素E又称生育酚，是一种脂溶性物质，在人体内主要参与生育功能、肌肉代谢等过程，具有强大的抗氧化性，是人体必须的微量元素之一。 目前 VitE的主要 分析 方法包括化学发光抑制法［1］、UV法［2］、GC法［3］、荧光法［4］和HPLC法［5］等。在这些方法中化学发光法仪器要求特殊，而荧光法、UV法、GC法易受到辅料干扰。本文采用反相HPLC法测定VitE片含量，方法准确，不受其他成分干扰，取得比较满意的效果。
1 仪器及试剂
SPD-M10A高效液相色谱仪（日本岛津）、LC-10AT 紫外检测器（日本岛津）；甲醇（分析纯，山东省禹王实业总公司禹城化工厂）、无水乙醇（分析纯，沈阳正信高 科技 研究 所试剂部）、维生素E醋酸酯对照品（日本信越制药株式会社）、维生素E片（沈阳药科大学药分教研室提供）。
2 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Shimadzu C18柱（5 μm,4.6 mm×250 mm）日本岛津公司；流动相：甲醇；流速：1.5 ml/min; 进样体积：20 μl；检测波长：284 nm；柱温：35 ℃； 理论 塔板数按维生素E峰 计算 应不低于5 000。
3 溶液的配制
3.1 对照品溶液制备 取VitE对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含VitE 1.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
3.2 供试品溶液配制 取VitE片10片，精密称定、研细。精密称取细粉适量加无水乙醇制成每1ml中含VitE 1.5 mg的溶液，摇匀。过滤，弃去初滤液，取续滤液作为含量测定的供试品溶液。
4 方法的专属性考察
在上述色谱条件下, 分别取对照品溶液、供试品溶液及流动相20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的主峰与对照品溶液的主峰位置相同（约15 min），空白辅料在VitE峰位置处无色谱峰，VitE峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。试验表明该方法具有良好的专属性，见图1。
5 方法学考察
5.1 线性关系及检测限
A.blank adfuvant solutionB.ControlC.Sample
图1 维生素E HPLC色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of Vitamin E
取VitE对照品适量，精密称定，用无水乙醇制备成含VitE 0.125、0.25、0.50、1.0、2.0、5.0 mg·ml-1的溶液，分别精密吸取20(l注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y对维生素E浓度X进行线性回归，得回归方程为：y=3 149 247x+4781.6 r=0.999 9(n=6)。 VitE浓度与色谱峰面积在0.125～5.0 mg·ml-1范围内线性关系良好（r＝0.999 9），检测限为0.4(g·ml-1（S/N=3）。
【摘要】
目的 建立测定维生素E(VitE)含量的高效液相色谱法。 方法 采用Shimadzu C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇为流动相；检测波长为284 nm，流速1.5 ml·min-1。结果 维生素E在0.125～5.0 mg·ml-1范围内，峰面积与其浓度线性关系良好（r＝0.999 9），高、中、低3种浓度的平均加样回收率为101.4％～102.7%，RSD为0.46％～0.71%，最低检测限为0.4μg·ml-1。结论 本法准确、简便、快速，适用于维生素E片的含量测定。
【关键词】 维生素E；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish a RP-HPLC for determination of Vitamin E.Method Vitamin E was determinated on HPLC instrument fixed a Shimadzu C18 column (4.6mm×250mm，5μm) with UV detection at 284nm, and the mobile phase was MeOH, the flow rate was 1.5ml·min-1.Results The calibration curve was linear(r=0.9999)within the range of 0.125～5.0 mg·ml-1 for Vitamin E, the average recovery rates were from 101.4% to 102.7% for three different levels of the amount of Vitamin E,RSD was from 0.46％ to 0.71%,and LOD was 0.4μg·mL-1.Conclusion This method was simple，quick，accurate and effective for determination of Vitamin E.It was suitable for the quality control for tabella Vitamin E.
Key words:Vitamin E;HPLC;determination
维生素E又称生育酚，是一种脂溶性物质，在人体内主要参与生育功能、肌肉代谢等过程，具有强大的抗氧化性，是人体必须的微量元素之一。 目前 VitE的主要 分析 方法包括化学发光抑制法［1］、UV法［2］、GC法［3］、荧光法［4］和HPLC法［5］等。在这些方法中化学发光法仪器要求特殊，而荧光法、UV法、GC法易受到辅料干扰。本文采用反相HPLC法测定VitE片含量，方法准确，不受其他成分干扰，取得比较满意的效果。
1 仪器及试剂
SPD-M10A高效液相色谱仪（日本岛津）、LC-10AT 紫外检测器（日本岛津）；甲醇（分析纯，山东省禹王实业总公司禹城化工厂）、无水乙醇（分析纯，沈阳正信高 科技 研究 所试剂部）、维生素E醋酸酯对照品（日本信越制药株式会社）、维生素E片（沈阳药科大学药分教研室提供）。
2 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Shimadzu C18柱（5 μm,4.6 mm×250 mm）日本岛津公司；流动相：甲醇；流速：1.5 ml/min; 进样体积：20 μl；检测波长：284 nm；柱温：35 ℃； 理论 塔板数按维生素E峰 计算 应不低于5 000。
3 溶液的配制
3.1 对照品溶液制备 取VitE对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含VitE 1.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
3.2 供试品溶液配制 取VitE片10片，精密称定、研细。精密称取细粉适量加无水乙醇制成每1ml中含VitE 1.5 mg的溶液，摇匀。过滤，弃去初滤液，取续滤液作为含量测定的供试品溶液。
4 方法的专属性考察
在上述色谱条件下, 分别取对照品溶液、供试品溶液及流动相20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的主峰与对照品溶液的主峰位置相同（约15 min），空白辅料在VitE峰位置处无色谱峰，VitE峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。试验表明该方法具有良好的专属性，见图1。
5 方法学考察
5.1 线性关系及检测限
A.blank adfuvant solutionB.ControlC.Sample
图1 维生素E HPLC色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of Vitamin E
取VitE对照品适量，精密称定，用无水乙醇制备成含VitE 0.125、0.25、0.50、1.0、2.0、5.0 mg·ml-1的溶液，分别精密吸取20(l注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y对维生素E浓度X进行线性回归，得回归方程为：y=3 149 247x+4781.6 r=0.999 9(n=6)。 VitE浓度与色谱峰面积在0.125～5.0 mg·ml-1范围内线性关系良好（r＝0.999 9），检测限为0.4(g·ml-1（S/N=3）。
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