【摘要】目的 研究 黄连、黄芩对牙龈紫质单胞菌、中间普氏菌、核梭杆菌厌氧菌的体外抑菌活性，为临床筛选中药 治疗 厌氧菌感染提供依据。 方法 将黄连、黄芩制成煎剂，采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法，测定此2种药物对3种细菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果 黄连对中间普氏菌的MIC为1∶640；对牙龈紫质单胞菌、核梭杆菌的MIC为1∶320。黄芩对牙龈紫质单胞菌、中间普氏菌的MIC为1∶10；对核梭杆菌的MIC为1∶20。结论 黄连、黄芩对上述3种试验菌株均具有不同程度的体外抑菌活性，其中黄连对中间普氏菌的抑菌活性最强，黄芩对3种细菌虽然也显示活性，但均较黄连弱。
【关键词】黄连；黄芩；琼脂；微生物敏感试验；细菌，厌氧
Inhibitory activity of coptidis rhizoma, radix scutellariae on three kinds of anaeroEies in vitro
GUO Xiujuan, ZHENG Jinxiu, LI Hong
Department of Immmunology, No.4 Hospital of HebEI Medical University, Hebei Province, Shijiazhuang 050011
【Abstract】 Objective To investigate the inhibitory activity in vitro of coptidis rhizoma, radix scutellariae on Porphyromonas gingivalis, Provotella intermedons, Fusobacterium nuleartum and provide evidence for drug susceptibility testing of the Chinese herbal. Methods The Chinese herbal was pureed, and adopted the methods of agar dilution recommended by NCCLS to investigate the MIC of Chinese herbal on the three different kinds of bacteria. Results The MIC of coptidis rhizoma on Probotella intermedons was 1∶640, and the MIC on Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nuleartum were 1∶320. the MIC of radix scutellariae on Porphyromonas gingivalis, Provotella intermedons and Fusobacterium nuleartum were 1∶10, 1∶10 and 1∶20 separately. Conclusion The coptidis rhizoma, radix scutellariae had different level inhibitory activity in vitro on the bacteria strain mentioned above. And the coptidis rhizoma had the most intensive inhibitory on Provotella intermedons,the radix scutellariae has lower lever inhibitory activity than the coptidis rhizoma.
【Key words】Coptidis rhizoma; Chinese herbal radix scutellariae; Microbe susceptibility testing; bacteria; Anaerobic
随着抗生素的大量使用，各种细菌包括厌氧菌的耐药率日趋升高。资料表明，厌氧菌可以通过产酶、细胞膜通透性改变、外排、线粒体突变、耐药基因传递等机制导致耐药率上升，而且长期使用抗生素治疗还可能诱导菌群失调和真菌的二重感染［1～3］。因此，本研究选择了3种致病性厌氧菌牙龈紫质单胞菌、 中间普氏菌、核梭杆菌作为研究对象，采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法，检测中药黄连、黄芩对这3种厌氧菌的体外抑菌活性，以期为临床 应用 中药治疗厌氧菌感染提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 菌株
牙龈紫质单胞菌（Pg ATCC33277）、中间普氏菌（Pi ATCC25611）、核梭杆菌（Fn ATCC10953）均由北京市口腔 医院 研究所提供。
1.1.2 中药煎剂的制备
称取黄连100 g，加水1～2 L，浸泡30 min后煎煮，煮沸后文火煎30 min，100目筛过滤。药渣加水0.5～1 L，按上述方法进行再次操作后，过滤药液，合并2次滤液，用文火浓缩为100 mL，使药液浓度为1∶1（每mL药液含生药1 g）。用孔径为0.22 μm的Millex-Gp滤器过滤除菌，4℃保存备用。同样制备黄芩煎剂备用。以上两药购自河北医科大学第四医院中药房。
1.1.3 试剂
Wilkins-Chalgren厌氧肉汤、Wilkins-Chalgren厌氧琼脂、M-H琼脂均购于英国OXOID公司。
1.1.4 仪器
比浊仪（美国DADE BERING公司），2.5 L厌氧罐（法国BIOMERIEUX公司），改良2.5 L厌氧产气袋、厌氧指示剂、Millex-GP 滤菌器（日本Nippon Millipore ltd 公司）。
1.2 方法
1.2.1 菌株复苏及菌悬液制备
用Wilkins Chalgren 厌氧肉汤将牙龈紫质单胞菌、中间普氏菌、核梭杆菌分别复苏，转种至含5%V/V脱纤维羊血的Wilkins Chalgren 厌氧琼脂平板上（该琼脂粉中已含有氯化血红素和维生素K），置厌氧环境中（80%N2，10%H2，10%CO2）35℃培养48 h，经形态、生化实验鉴定为纯培养物后用盐水制备菌悬液，采用麦氏比浊法用比浊仪调菌悬液浓度达0.5 Mcfarland单位［含 (1～2) ×108 cfu/mL］，稀释10倍备用。
1.2.2 琼脂稀释平皿的制备
取9支无菌试管，第1管加入1 mL黄连煎剂，2～9管加入1 mL 0.9%氯化钠注射液，第2管再加入1 mL黄连煎剂，2～9管依次做倍比稀释。将Wilkins-Chalgren琼脂融化，置于水浴中平衡置50℃，按5%V/V比例加入脱纤维羊血，无菌操作吸取9 mL加置上述试管中，混匀倾注7 mL于平皿中。使琼脂平皿黄连倍比稀释度分别为1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280、1∶2560，黄连浓度分别为100、50、25、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39 mg/mL。同样方法制备含黄芩的Wilkins-Chalgren琼脂平皿。同时设不加中药平皿为生长对照。
1.2.3 接种琼脂稀释平皿
用微量多点接种仪将制备好的牙龈紫质单胞菌、中间普氏菌、核梭杆菌悬液分别点种1 μL于含不同浓度的黄连、黄芩的Wilkins-Chalgren琼脂平皿上，置厌氧环境中，35℃培养48 h。
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